免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP) 是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與ProteinA/G偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
 

圖1.IP原理及流程

在免疫沉淀實驗后的WB驗證環(huán)節(jié)中，當(dāng)使用常規(guī)的 Anti-IgG (H+L) 酶標(biāo)二抗時，通常會出現(xiàn)對應(yīng)免疫沉淀一抗變性后產(chǎn)生的重鏈（50kDa）和輕鏈（25kDa）兩條帶。如果檢測的目的蛋白分子量在此附近時，就會受到這兩條帶的干擾。
 

圖2.傳統(tǒng)二抗WB驗證IP，重鏈輕鏈干擾

那么如何避免避免IP檢測過程中的重、輕鏈干擾，達(dá)科為可為您提供兩種解決方案：

方案一：WB抗體和IP抗體選擇不同種屬

方案二：選擇只識別天然二硫鍵構(gòu)象的二抗

Rockland TrueBlot^?二抗，是一系列單克隆二抗，與傳統(tǒng)二抗不同的是，TrueBlot^?二抗只識別天然二硫鍵的IgG，而不識別被還原打開的二硫鍵，因此可以消除IP檢測過程中變性抗體重鏈和輕鏈的影響。

圖3.Rockland TrueBlot?二抗vs 傳統(tǒng)二抗

TrueBlot^?系列產(chǎn)品注意事項

1. TrueBlot^?產(chǎn)品適用的前提：當(dāng)IP抗體與WB一抗同源。

2. Rabbit TrueBlot^?不能與Protein A/G結(jié)合的Beads一起用。推薦TrueBlot^?配套的Beads。

3. 非IP驗證的WB實驗也可使用TrueBlot^?系列產(chǎn)品避免重鏈和輕鏈的影響。

促銷活動

促銷活動活動范圍：Rockland全系列二抗（包括TrueBlot^?系列二抗）

活動內(nèi)容：請咨詢當(dāng)?shù)貥I(yè)務(wù)員

活動時間：即日起到9.30日

活動代碼：DIST-Q3CNSEC

Rockland熱賣TrueBlot?產(chǎn)品列表

歡迎聯(lián)系當(dāng)?shù)貥I(yè)務(wù)員索取高清版TrueBlot^?選擇指南