1. 手動(dòng)脫機(jī)調(diào)補(bǔ)償及自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償

A. 手動(dòng)調(diào)補(bǔ)償（一般在僅有樣本管或者自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償后微調(diào)時(shí)使用）

打開(kāi)軟件，插入一個(gè)數(shù)據(jù)（示例中為彩點(diǎn)圖），當(dāng)插入一個(gè)圖形后，如需更換數(shù)據(jù)的顯示方式，如想將彩點(diǎn)圖更換為其它圖形（如密度圖等），可選中該圖形，直接按照下述步驟更改。

圈中目的細(xì)胞群，拖至空白處形成一個(gè)新的圖形，并根據(jù)需要改動(dòng)橫縱坐標(biāo)軸的參數(shù)。本示例中以FITC和PE為例，調(diào)節(jié)此兩通道之間的補(bǔ)償。下圖所示，補(bǔ)償未經(jīng)過(guò)調(diào)節(jié)，F(xiàn)ITC與PE之間有補(bǔ)償。

此時(shí)可以手動(dòng)調(diào)節(jié)兩通道之間的補(bǔ)償，該數(shù)據(jù)為FITC單管，可用PE-FITC調(diào)節(jié)FITC滲漏到PE通道去的熒光。步驟如下圖所示：

出現(xiàn)補(bǔ)償編輯欄，從PE通道中去除FITC的熒光信號(hào)，使PE通道的Mean/Median值與陰性細(xì)胞群一致。

點(diǎn)擊OK，則FITC滲漏到PE通道的熒光被扣除。

B. 自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償（需要陰性管及各單陽(yáng)管）

    打開(kāi)軟件，按照下述步驟操作。

建立直方圖后，在原本的版面Page 1后面出現(xiàn)Scatter Plot及其它各個(gè)單管的Control界面。

接著，在Scatter Plot版面中，將門(mén)的位置移至正確的細(xì)胞群所在的位置，如下圖所示。

如所示的方形門(mén)不能正確的圈出細(xì)胞群，可按以下步驟將該門(mén)改變?yōu)樽杂尚伍T(mén)等。

圈好門(mén)之后，選中單管Control版面，按照陰性細(xì)胞與陽(yáng)性細(xì)胞的位置調(diào)整Marker門(mén)的位置。

依次調(diào)整好各單管Control的Marker門(mén)的位置。此處不一一列舉?；氐窖a(bǔ)償界面。此處的3、4適用于使用補(bǔ)償beads調(diào)節(jié)補(bǔ)償?shù)那闆r（由于本次數(shù)據(jù)為細(xì)胞，此處不詳細(xì)列出，如對(duì)此步驟感興趣，可咨詢(xún)小達(dá)君）

則自動(dòng)調(diào)補(bǔ)償就完成了。補(bǔ)償矩陣及溢出矩陣就出現(xiàn)在補(bǔ)償欄中。

此時(shí)，可點(diǎn)擊保存將此補(bǔ)償下來(lái)，以便下次使用?；氐絇age 1，當(dāng)添加一個(gè)未經(jīng)過(guò)補(bǔ)償調(diào)節(jié)的數(shù)據(jù)時(shí)，將該補(bǔ)償拖過(guò)去，則該補(bǔ)償矩陣就被應(yīng)用到數(shù)據(jù)中。

或者通過(guò)右鍵-Format-Overlay-Compension將補(bǔ)償應(yīng)用到該數(shù)據(jù)中。如下圖所示：

2. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)

選擇右鍵-Statistics，可添加門(mén)數(shù)據(jù)及十字門(mén)象限數(shù)據(jù)。

本期就先介紹到這里，大家是不是對(duì)Denovo軟件有了更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)？我們會(huì)陸續(xù)推出Denovo軟件的功能介紹及流式數(shù)據(jù)分析的技巧，感興趣的同學(xué)可以下載試用哦。