單細胞全基因組測序是在單細胞水平上對全基因組進行擴增與測序的一項技術(shù)，是近年來研究最為熱門最為前沿的技術(shù)之一。原理非常簡單，首先將要研究的單個細胞分離出來進行全基因組DNA擴增，獲得高覆蓋率和完整的基因組之后進行高通量測序，進而揭示單個細胞間的基因差異。因此，在擴增過程中獲得高覆蓋率以及高保真性的擴增產(chǎn)物是得到全面準確測序結(jié)果的必要條件。

傳統(tǒng)的PCR方法在擴增過程中容易出現(xiàn)較多的擴增偏倚、基因缺失等現(xiàn)象，尤其是在單細胞擴增過程中容易丟失大量序列。而近年來發(fā)展出來的MDA（Multiple Displacement Amplification,多重置換擴增）技術(shù)不僅具有高分辨率和高基因組覆蓋度，而且具有更好的敏感性和特異性，因而是公認較好的單細胞基因組擴增技術(shù)。下面就為大家介紹一款來自Expedeon公司基于MDA技術(shù)的單細胞全基因組擴增試劑盒TruePrime^? Single Cell WGA Kit。

TruePrime^?采用MDA技術(shù)，基于新型的TthPrimPol 引物酶和Phi29 DNA聚合酶，擴增過程無需添加隨機引物，減少了擴增偏倚，提高了擴增過程的覆蓋率和保真性，并且對于污染的外源DNA不敏感，可重復性好。TruePrime^?可用于單個細胞或少量細胞的全基因組擴增，與常見的NGS平臺如Illumina和IonTorrent等兼容性良好。

△圖1：基于TthPrimPol 引物酶和Phi29 DNA聚合酶的擴增原理

TruePrime^?技術(shù)優(yōu)勢

No1. 起始樣本量低

△圖2：使用人體全基因組樣本進行連續(xù)倍比稀釋后用TruePrime^?進行擴增，Ion Torrent進行測序分析

結(jié)果表明僅使用1fg 的樣本即可以擴增出95%以上的人體基因組片段；而使用隨機引物擴增的結(jié)果中，約有20%不匹配任何生物體的非特異性序列（右下圖）。

No2. 高保真性

△圖3：分離單個HEK293細胞，按照TruePrime^?說明書擴增3小時和6小時，使用PicoGreen試劑盒檢測DNA產(chǎn)量

分析數(shù)據(jù)表明，TruePrime^?擴增結(jié)果和陰性對照組（原始樣品）的各項數(shù)據(jù)差異均最小。

No3. 高覆蓋率

△圖4：左圖：TruePrime^?擴增產(chǎn)物和原始樣本的染色體覆蓋率對比；

右圖：3號染色體圖譜的覆蓋模型，TruePrime^?擴增得到的DNA與未擴增的DNA覆蓋率接近。

擴增能力強，無引物互作，無擴增偏倚，覆蓋率高，保真性好，重復性好，集諸多優(yōu)勢于一身的TruePrime^?，還有什么理由不選擇呢？TruePrime^?會為您的單細胞測序工作帶來極大的便利！除此之外，Expedeon還提供用于擴增cfDNA, circular DNA等多種類型DNA的試劑盒喲！

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Expedeon（英國）是世界領(lǐng)先的生物分子結(jié)合技術(shù)和服務專業(yè)公司。公司為研究機構(gòu)的科學家和商業(yè)生產(chǎn)提供相關(guān)試劑產(chǎn)品。公司提供包括基因組學、免疫學、蛋白質(zhì)組學等相關(guān)產(chǎn)品。主要產(chǎn)品線包括Expedeon^?, Lightning-Link^?, InnovaCoat^?,Thunder-Link^?, RunBlue^?, GELFREE^?, TruePrime^?,Sunscript^?, InstantBlue?等。產(chǎn)品提供給全球的科研實驗室，制藥企業(yè)，生物技術(shù)和診斷公司等。